CRISPR Cas9 是一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定基因修饰的技术，是细菌和古细菌在长期应对病毒和质粒不断攻击而演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，其原理是Cas9蛋白通过导向性RNA（guide RNA，sgRNA）识别特定基因组位点并进行剪切， 它能够共定位 RNA、DNA 和蛋白，从而拥有巨大的改造潜力。将蛋白与无核酸酶的 Cas9(Cas9 nuclease-null)融合，并表达适当的 gRNA，即可靶定任何 dsDNA 序列，而 RNA 可连接到gRNA 的末端，不影响 Cas9 的结合。因此，Cas9 能在任何 dsDNA 序列处带来任何融合蛋白及 RNA，这为生物体的研究和改造带来巨大潜力。目前已被广泛应用于基因组的精确编辑修饰，尔丙生物可以提供基于CRISPR / Cas9系统的基因敲除稳定细胞系以及基因敲除小鼠服务。

服务流程

  1． 细胞分型；

  2． 细胞预实验；

  3． 针对敲除/敲入目的基因设计合适靶点；

  4． 构建 cas9-gRNA表达质粒并测序验证；

  5． 目的细胞培养，并将构建好的表达质粒转染细胞；

  6． 抗性筛选获得单克隆细胞；

  7． 基因敲除细胞系的检测。

客户提供

  1. 待敲除目的基因信息，即靶向DNA信息；

  2. 需构建敲除株的细胞信息，如客户提供细胞，新鲜细胞，灌满培养基运输，或细胞冻存管，干冰运输。

结果交付

  1. 基因敲除稳定细胞株；

  2. 验证报告；

  3. 详细实验报告（试剂耗材、仪器设备、操作）及相关原始数据。